故障排除

T3. 无峰

[如何确定原因] 首先分析t0 。

t0分析结果 原因
未检测到t0 检测器故障
t0发生了变化 泵故障
t0没有发生变化 色谱柱故障

● 色谱柱故障的解决方案

色谱柱种类 原因 解决方案
反相色谱柱 样品的疏水性太强以至于它们仍留在于色谱柱中。 增加流动相的洗脱力直到样品洗脱。
例如，
1. 增高甲醇或乙腈的浓度（最高100%）。
2. 如果样品还没有洗脱，将10%-30% 强洗脱性有机溶剂（如四氢呋喃或氯仿）加入甲醇或乙腈中（例如， 四氢呋喃 : 甲醇 = 30 : 70）。
金属配合物或碱性化合物吸着在色谱柱上。 碱性化合物可能会与硅胶上残存的硅醇基发生反应。请使用残存硅醇基含量很少的COSMOSIL 5C18-MS-II，或添加0.1-1%的酸到流动相中。（如三氟乙酸，乙酸）
金属配合物可能与填料中的少量金属发生反应。 请在流动相中添加5 mmol/l 乙二胺四乙酸二水合物（EDTA ・2Na） 。
正相色谱柱 样品的亲水性太强以致于它们仍留在色谱柱中。 增加流动相的洗脱力直到样品洗脱。 使用洗脱力强的溶剂例如乙醇，或着增加流动相浓度。
金属配位或基础化合物可以吸附在色谱柱上。 添加0.1-1%酸到流动相中 （如三氟乙酸， 乙酸）。
糖类分析柱
（Sugar-D， NH2-MS）
或亲水性色谱柱（HILIC）		 若使用的色谱柱是COSMOSIL 5NH2-MS，样品会可能会吸附在固定相中的氨基上。 使用COSMOSIL Sugar-D降低吸附发生的可能性。
样品的亲水性太强以致于它们仍留在色谱柱中。 增加流动相中水的浓度直到样品洗脱。
COSMOSIL Sugar-D或COSMOSIL HILIC可在100%水的条件下使用。COSMOSIL 5NH2-MS可在50%水的条件下使用（例如， 乙腈 : 水 = 50 : 50）。
凝胶色谱柱（Diol） 样品与硅醇基发生了反应。 加入约0.3 mol/l 盐（如氯化钠）以增加流动相的离子强度。
调整流动相的pH值至5.5或更低以防止离子相互反应。
样本可能会因亲水性相互作用而被吸着在色谱柱内。 添加10-50%有机溶剂至移动相中（如乙腈）
疏水性色谱柱（HIC） 样品的疏水性太强。 添加5%有机溶剂（如甲醇或乙腈）至移动相中。
在进样前有硫酸铵沉淀。 减少硫酸铵浓度至0.5mol/l或更少直到没有显著沉淀出现。

● 泵故障的解决方案

原因 解决方案
泵中有气泡 脱气（请参考T7）。
溶剂渗漏 拧紧连接器或更换套管。

● 检测器故障的解决方案

原因 解决方案
检测器没有正确连接 按照用户操作手册正确连接检测器。
检测器信号有问题 请联系检测器制造商。
样品不在紫外吸收范围内 如果样品没有紫外吸收或者其范围很小，请使用示差折光检测器（RI检测器）或蒸发光散射检测器（ELSD），或着将样本标签化。

T4. 基线不稳定

原因 解决方案
以前吸附在柱里的杂质被洗脱了出来 使用强极性溶剂洗脱（请参考Q13）。
COSMOSIL PE-MS・πNAP・PYE・NPE・PBB-R・Cholester 的固定相本身有紫外吸收。所以微量的固定相脱落会导致基线不稳定 使用强极性溶剂洗脱（请参考170页Q13） 。
柱压的突然变化可能会在柱内产生气泡 脱气（请参考T7） 。
使用示差检测器（RI检测器）时
温度变化太大 使用温度调节装置保持恒温。注意不要让空调直吹检测器。
注意；
为了避免空调的影响，可以将检测器的配管包裹起来。
流动相中残留气体的量发生了变化 使用超声波等脱气装置给流动相脱气。
使用紫外光可见光检测器时出现尖峰
色谱柱或检测器中有气泡 关闭检测器出口并增加压力以祛除气泡。
注意；
请注意压力太高会损坏检测器。如果仍有气泡存在，请使用高粘度溶剂（如异丙醇）清洗15分钟，此时请断开色谱柱和检测器的连接。
柱温高于流动相的沸点从而在柱内产生了气泡 请在适当温度下进行分析。一般20-50C 是为较适宜的温度。
注意；
为了得到最好的结果，请在低于流动相沸点 20-50C的温度下进行分析。（例如，使用甲醇时[沸点：64.7C]，请将分析温度设定在45C以下）
流动相中使用离子对试剂或缓冲液时
未达到柱平衡 请增加平衡时间。特别是在使用离子对试剂或缓冲液时，需要更长的平衡时间。
流动相中的盐被析出 （a） 降低缓冲液浓度
（例如， 100 mmol/l → 20 mmol/l）
（b） 更换缓冲溶液
（例如， 磷酸缓冲溶液 → 醋酸盐缓冲溶液）
（c） 降低有机溶剂的浓度
（例如， 70% 乙腈 : 水= 70 : 30 → 50 : 50）
（d） 更换有机溶剂
（例如， 乙腈 → 甲醇）

T5. 保留时间不稳定

● 设备原因

设备 原因 解决方案
泵 止回阀内有气泡。 脱气 （请参阅T7）。 正相溶剂沸点较低，所以很容易产生气泡。此外，它的粘性也很低从而使气泡很难排出。
溶剂泄漏。 拧紧泄漏部分。如果仍有溶剂漏出，请更换部件。
（温度调整）恒温槽 在没有使用恒温槽或柱温箱的情况下，柱温度会随季节和时间而变化。 请使用恒温槽或柱温箱保持稳定的柱温。
注意；
在做室温分析时，请将恒温槽或柱温箱的温度设定为高于室温5C。

● 色谱柱因素

色谱柱种类 原因 解决方案
反相色谱柱 平衡不充分（流动相中使用了离子对试剂时）。 增长平衡时间。在使用离子对试剂时，需要增长平衡时间。
C18色谱柱使用100%水做流动相时，可能会引起固定相脱落。 COSMOSIL C18-PAQ兼容100%水流动相。
注意；
如果保留时间不稳定，请使用有机溶剂（如甲醇 : 水= 70 : 30）冲洗色谱柱。
正相色谱柱 少量存在于有机溶剂中的水可能会影响保留时间。 请使用不含水的流动相。如果流动相含水，请更换样品溶剂或减小进样量。如果不慎有水混入，请使用乙醇清洗。
糖分析专用色谱柱（Sugar-D，NH2-MS）或者亲水性色谱柱（HILIC） 少量填料脱落。 COSMOSIL Sugar-D 和COSMOSIL HILIC 可以用100%水冲洗15分种来恢复。COSMOSIL 5NH2-MS 可以用50%的水溶剂（如乙腈 : 水= 50: 50）进行15分种冲洗恢复。