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科思美析 PBr

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  • 可在反相条件下分离亲水化合物
  • 分离条件比HILIC 简单
  • 载样量大于HILIC
  • 分离模式与C18 色谱柱不同

产品信息

规格

填料 5PBr
硅胶 高纯度球形多孔硅胶
平均粒径 5 µm
平均孔径 约 120 Å
比表面积 约 300 m2/g
固定相 Stationary Phase
Pentabromobenzyl group
键合类型 单点键合
封端处理 有
碳含量 约 8%
适用pH范围 2-7.5

可在反相条件下分离亲水化合物

亲水相互作用色谱法(HILIC) 是一种常用于亲水化合物的分析手段。但是由于人们对HILIC 熟悉程度的欠缺，其分析条件的设定往往比较困难，而且当样品中水浓度过高时还会导致峰形不良。COSMOSIL PBr 可在反相条件下分离亲水化合物，即使分析水浓度很高的样本也可得到尖锐的峰形。

Chromatogram

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 150 mm 样品
  • Uracil (0.1 mg/ml)
  • Uridine (0.2 mg/ml)
流动相 HILIC: Acetonitrile / H2O = 90/10
PBr:H2O
流速 1.0 ml/min 样品溶剂 H2O
温度 30°C Structure
检测器 UV260nm

与C18 色谱柱的比较

COSMOSIL PBr 在反相条件下对亲水化合物的保留能力远远大于C18 色谱柱。

Chromatogram

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D.×250 mm 样品
  1. Ammelide (0.1 mg/ml)
  2. Cyanuric Acid (0.5 mg/ml)
  3. Ammeline (0.1 mg/ml)
  4. Melamine (0.1 mg/ml)
Structure
流动相 20 mmol/l Phosphate Buffer(pH7.0)
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV225nm 进样量 1.0 ul

分离机制

反相模式利用疏水性的不同来分离化合物(如下图(1)中CH2基个数不同的化合物)，所以C18色谱柱分离不了疏水性很小的化合物(如下图(2)中OCH2CH2基个数不同的化合物)。但是COSMOSIL PBr利用色散力可以很容易的分离这些疏水性小的化合物。

疏水性相差较大的化合物

Chromatogram

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D.×150 mm 样品
  • Benzene
  • Toluene
  • Ethylbenzene
  • n-Propylbenzene
  • n-Butylbenzene
流动相 Methanol/ H2O = 80/20
流速 1.0 ml/min
温度 30°C Structure
检测器 UV254nm

疏水性相差不大的化合物

Chromatogram

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D.×150 mm 样品
  • Benzyl Alcohol
  • Ethylene Glycol Monobenzyl Ether
  • Diethylene Glycol Monobenzyl Ether
  • Triethylene Glycol Monobenzyl Ether
  • Tetraethylene Glycol Monobenzyl Ether
流动相 Methanol/ H2O = 60/40
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV254nm

色散力

一般来说非极性分子的电荷是均匀分布的。但是电荷无时无刻不处在运动之中，如果只观察某一瞬间状态，非极性分子的电荷也会发生偏移。由这种电荷瞬时偏移所产生的微弱引力就叫做色散力。

具有较大色散力的化合物

  • 锁长较长，分子量较大的化合物
  • 具有较大官能团的原子(如卤族)
  • 电荷的运动很活跃的化合物(如芳香族化合物)

COSMOSIL PBr色谱柱的五溴苯基固定相中的五个溴原子具有较大的色散力，从而可以利用色散力的不同进行分离。

COSMOSIL PBr擅长分离的化合物

COSMOSIL PBr对环状化合物和氨基化合物有较强的保留能力。

(流动相)
(1) Methanol/ 20mmol/l Phosphate buffer(pH7.0) = 10/90
(2) 20mmol/l Phosphate buffer(pH2.5)
(3) 20mmol/l Phosphate buffer(pH7.0)
(4) Methanol/ H2O = 10/90

色谱柱耐久性测试

COSMOSIL PBr 在100%水环境下经过1000次分析后性能仍然保持稳定。

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. × 150 mm 样品
  • L-Noradrenaline (0.5 mg/ml)
  • L-Adrenaline (0.5 mg/ml)
  • Dopamine (0.5 mg/ml)
  • L-DOPA (0.5 mg/ml)
流动相 20 mmol/l Phosphate buffer(pH2.5)
流速 1.0 ml/min
温度 40°C
检测器 UV280nm 进样量 1.0 µl

应用数据

Gentamycin

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 150 mm 样品 Gentamicin
(C1a, C2, C2a, C1)
流动相 0.1% Pentafluoropropionic Acid -Acetonitrile/ H2O = 10/90
流速 0.2 ml/min
温度 40°C
检测器 ESI-MS, Positive, SIM 进样量 1.0 µl

Nucleic Acid Base

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 150 mm
流动相 Methanol/ 20mmol/l Phosphate buffer(pH7.0) = 10/90
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV260nm
样品
  1. Cytosine (0.05 mg/ml)
  2. Uracil (0.05 mg/ml)
  3. Thymine (0.05 mg/ml)
  4. Guanine (0.05 mg/ml)
  5. Adenine (0.05 mg/ml)
进样量 1.0 µl

Coenzyme A

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 150 mm
流动相 Methanol/ 20mmol/l Phosphate buffer(pH7.0) = 20/80
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV260nm
样品
  1. Malonyl Coenzyme A (0.25 mg/ml)
  2. Coenzyme A (0.25 mg/ml)
  3. Acetyl Coenzyme A (0.25 mg/ml)
进样量 2.0 µl

Methylimidazole Isomers

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 250 mm
流动相 20mmol/l Phosphate buffer(pH2.5)
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV220nm
样品
  1. 1-Methylimidazole (0.1 mg/ml)
  2. 2-Methylimidazole (0.1 mg/ml)
  3. 4-Methylimidazole (0.1 mg/ml)
进样量 1.0 µl

应用数据

表面活性剂

COSMOSIL PBr 对表面活性剂的分离效果远高于C18 或PFP。

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 150 mm 样品 Triton(R) X-100 (50 mg/ml)
流动相 5C18-MS-II, 5PFP: Methanol/ H2O = 80/20
PBr: Methanol
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV254nm 进样量 2.0 µl

卤素化合物

COSMOSIL PBr 对卤素化合物有很好的分离效果。

分析条件
柱尺寸 4.6 mm I.D. x 150 mm 样品
  1. Fluorobenzene (1.0 mg/ml)
  2. α,α,α-Trifluorotoluene
    [Benzotrifluoride] (0.25 mg/ml)
  3. Toluene (2.5 mg/ml)
  4. Chlorobenzene (5.0 mg/ml)
  5. Bromobenzene (5.0 mg/ml)
  6. Iodobenzene (2.0 mg/ml)
流动相 Methanol/ H2O = 65/35
流速 1.0 ml/min
温度 30°C
检测器 UV254nm 进样量 1.0 µl

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使用信息

色谱柱 5μm PBr
内径(mm) 2.0 3.0 4.6 10 20 30
柱长(mm) ALL ALL ALL ALL ALL ALL
出厂溶剂 乙腈 / 水 = 60 / 40 甲醇 / 水 = 80 / 20
冲洗方法
  1. 去除色谱柱内的缓冲液，盐，酸的方法：使用不含缓冲液，盐，酸的流动相冲洗10-15分钟。
    例：流动相为甲醇/磷酸缓冲液（20mmol/L） =50/50时，就使用甲醇/水 =50/50冲洗
  2. 冲洗色谱柱内附着物的方法，基线不稳时的解决方法
  • 样本不是蛋白质时，使用甲醇或四氢呋喃冲洗。
  • 样品是蛋白质时，使用含0.1%三氟乙酸的50-70%的乙腈/水冲洗
保存方法
  1. 短期（数日）保存：
    使用不含缓冲液，盐，酸的流动相冲洗10-15分钟。保存。
    例：流动相为甲醇/磷酸缓冲液（20mmol/L） =50/50时，就使用甲醇/水 =50/50冲洗
  2. 长期（1个月以上）保存：
    使用后，先用不含酸和盐的流动相清洗色谱柱，再将流动相置换为乙腈/水=70/30或 甲醇/水=70/30，保存。
pH范围 pH2～pH7.5
最大耐压 20MPa 15MPa
温度范围 最高可耐60度，建议在20~50度下进行分析。
可使用的溶剂

除碱溶液和强酸溶液（pH1.5以下）以外都可以使用。（强碱溶液会使硅胶溶化，强酸溶液会使固定相脱落）
注意点：
溶剂粘度过高会导致压力上升，请将压力控制在20Mpa以下。 使用酸性流动相或凝固点高的溶剂后，必须清洗色谱柱。
注意事项
  • 一般情况下缓冲液浓度为0.005~0.02 mol/L即可。
  • 流动相在使用前一定要通过0.5μm以下的滤膜过滤。
  • 不推荐使用乙腈作为流动相，推荐使用甲醇作为流动相。
  • 蛋白质反相模式分析时，请使用大孔径色谱柱（孔隙直径300Å) COSMOSIL Protein - R（粒径5μm）。

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产品手册

订购信息

分析柱 / 制备柱 (粒径: 5 µm)

COSMOSIL 5PBr

产品名称 尺寸 货号 价格
COSMOSIL 5PBr
保护柱
4.6 mm I.D. x 10 mm
保护柱芯*		 12444-14 e-Nacalai
10.0 mm I.D. x 20.0 mm 12396-41
COSMOSIL Guard
保护柱套		 4.6 mm I.D. 38009-79
COSMOSIL PBr
2.0 mm l.D. x 150 mm 12392-81 e-Nacalai
4.6 mm l.D. x 150 mm 12394-61
4.6 mm l.D. x 250 mm 12395-51
10.0 mm I.D. x 250 mm 12397-31
20.0 mm I.D. x 250 mm 12398-21

*柱芯需与柱套配套使用