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피크 모양 불량

T1. 피크 모양 불량

Poor peak shapes
증상 원인 해답
시료 중 일부 요소가 테일링 충진물과 염기성 화합물 사이에 이온 교환 작용발생. 잔류 실라놀 그룹이 적은 C18-MS-II 칼람으로교체 또는 이동상에 0.1-1%사이의 산을 첨가.
금속배위 화합물과 충진물 사이의 배위작용. 용매에 5mmol/l의 di-sodium dihydrogen ethylenediaminetetraacetatedihydrate (EDTA・2Na)을 첨가한다.
U충진물과 시료 사이의 수소결합 반응. 유기용매 종류를 바꾼다(예: 아세토나이트릴에서 메탄올로).
모든 종류의 시료가 테일링
(피크의 뒤 쪽 끌림)발생		 충진물 내부에 공간이 생겼거나 칼람의 성능이악화됨. 칼람 교환.
(만약 칼람으로 교체 후에도 테일링이 개선이안되면) 시료가 칼람 출구에서 확산되어 나오는것임. 불용체적(dead volume) 감소 (172 페이지 Q25의 불용체적에 관한 정보 참조).
피크의 앞쪽 끌림(Fronting) 많은 양의 시료를 주입 시 시료의 용출 특성이달라지거나 또는 용매의 pH 조절 불량. 시용 용매로 시료를 녹인다. 만약 시료가 녹지않으면 먼저 잘 녹는 용매로 녹인 후 사용 용매에 다시 녹인다.
시료 주입량을 1/2-1/10사이로 줄임.
주의;
스파이크 피크가 발생하거나 피크가 넓어 질수 있다.
확산 피크(broad peak) 1시료의 분자량이 높을 때
(MW: 2,000 또는 이상)		 단백질과 같은 고분자는 충진물의 충진 입자 내부로 통과 할 수 없다. 역상용 COSMOSIL Protein-R과 같은 내공이 큰충진 입자 칼람 사용(내공 크기: 300Å) 42 페이지에 자세한 정보가 있습니다.
시료 양이 너무 큼. 시료 량을 1/2~1/10 사이로 줄인다.
주의;
테일링 피크가 발생 할 수 있습니다.
시료 중 일부분의 피크가 확산되어 나올 경우,그 확산 피크의 화합물이 칼람 충진물에 흡착되기 때문입니다. COSMOSIL Protein-R을 사용하십시오. 이 칼람은 회복율(recovery rate)이 매우 높습니다. 42페이지의 정보를 참고하십시오.
모든 시료가 확산 피크로 나올 경우 칼람이 손상됐을 수 있습니다. 칼람 교체.
친 유성 크로마토그라피(HIC)일 경우 시료용매에 암모늄 설페이트(ammonium sulfate)농도가너무 낮음. 암모늄 설페이트 농도를 1mol/l 또는 이상조정.
확산 피크 2
시료 분자량이 낮을 때
(MW: 2,000 또는 이하)		 시료 량이 너무 클 때. 시료 량을 1/2~ 1/10 사이로 줄임.
주의;
확산 피크 대신 테일링 피크가 발생 할 수 있습니다.
시료 중 일부분의 피크가 확산되어 나올 경우, 그 확산 피크의 화합물이 칼람 충진물에흡착되기 때문입니다. 충진물이 다른 칼람으로 교체하십시오. (염기성시료용으로 COSMOSIL 5C18-MS-II 칼람을 추천합니다).이 칼람은 염기성 화합물 흡착이 매우 낮습니다. 14 페이지를 참조하십시오.
모든 시료가 확산 피크로 나올 경우 칼람이손상됐을 수 있습니다. 칼람 교체.
스파이크(spike) 피크 또는 분산(split) 피크가 시료의 원인에 의해 발생 2 개 이상의 시료가 있어서 그 중 시료가 약간 분리가 덜 될 경우. 두 시료의 완전한 분리를 위한 조건을 찾는다.
이동상과 시료 녹인 용매가 분리 조건에 있어서 다른 특성을 같을 때. 이동상으로 시료를 녹인다. 만약 시료가 녹지않으면 먼저 잘 녹는 용매로 녹인 후 이동상으로 다시 녹인다.
시료 주입량을 1/2-1/10사이로 줄임.
해리성 시료와 비 해리성 이온 시료를 섞는다. 이동상의 pH를 pka± 2에 조정한다. 또는 더 많은 이온 시료를 가한다.
모든 시료가 스파이크 피크 또는 분산 피크가 발생할 때 이동상과 시료 녹인 용매가 분리 조건에 있어서 다른 특성을 같을 때. 이동상으로 시료를 녹인다. 만약 시료가 녹지않으면 먼저 잘 녹는 용매로 녹인 후 이동상으로 다시 녹인다.
시료 주입량을 1/2-1/10사이로 줄임.
칼람이 손상되었을 때. 칼람 교체.

T2. 고스트 피크(Ghost peaks)

분리 모드 원인 해답
<역상 크로마토그라피>
구배(gradient)분리 방법을 이용		 물 이동상에 불순물 피크 HPLC 급 증류된 물 사용.
프리 칼람(pre-column)사용. 198 페이지를 참조하십시오.
< 역상 크로마토그라피>
단백질 시료		 전에 분석 시 흡착된 시료 다음 분석 시 용출. 칼람을 세척하십시오. 세척 방법에 대한 더 자세한 방법은 170 페이지를 참조하십시오.
단백질 분리에 회수율이 높은 COSMOSIL Protein-R 칼람을 추천합니다. 42 페이지를 참조하십시오.
 
<모든 분리 모드>
시료 용매와 이동상이 상당히차이가 남		 시료 용매가 피크를 유발함. 이동상과 같은 용매로 시료를 녹인다.
이동상으로 시료를 녹인다. 만약 시료가 녹지않으면 먼저 잘 녹는 용매로 녹인 후 이동상으로 다시 녹인다.
 
<모든 분리 모드>
블 랭 크 분 석(blank analysis)
시 피크가 나옴.
(시료 주입 시 피크 면적이 감소)		 인젝터가 오염. 이동상 20ml 용매를 이용하여 주사기로 인젝터를 세척.
예: 메탄올은 오염물질을 녹일 수 있습니다.
마이크로 실린지 오염. 이동상용 메탄올, 클로로포름 또는 물을 이용하여 오염물질을 세척. 초음파 세척도 효과적입니다.
기타 오염 또는 시료의 물성 악화 시료를 다시 제조.
안정제 있는 용매 사용 안정제 없는 HPLC급 용매사용.